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固相合成的常见概念

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固相多肽合成现在使用的主要有两种策略:BOC和FMOC两种。BOC方法合成过程中,需要反复使用TFA脱BOC,而且在最后从树脂上切割下来需要使用HF;FMOC方法反应条件温和,在一般的实验条件下就可以进行合成。下面让小编带你了解一下固相合成的常见概念。


固相合成常用的树脂

在固相合成中,树脂的材料通常为聚苯乙烯-二乙烯苯,大小为75-150μm,交联度为1-2%,如今使用的交联度大多数为1%,由于在这种交联度下,在DMF,DCM中,树脂具有很好的溶胀性能,其在立体上为一个空间网状结构,在树脂内部反应物分子能够自由的移动。

连接手臂一端作为反应位点,一端连接在树脂上,其为树脂中最关键的部分。2-Cl-Trt,Rink-Amide-MBHA,PAM,MBHA,Wang等均是现在广泛使用的树脂。其中,在BOC策略中使用PAM,MBHA,由于他们对酸的稳定性比较高,只有在在HF,TFMSA等强酸条件下,才能够将它们切割下来。


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固相合成切割方法

完成固相合成以后,若想要从树脂上将多肽切割下来,则必须选择合适的切割试剂,再使用冰乙 醚沉淀,离心将沉淀收集,通过HPLC分离纯化,冷冻干燥从而使最后产品获取。

氨基酸序列会因为选择的树脂不同而不一样,因此在切割时候,也需要选择不完全相同的切割方法。通常选择的切割条件为酸性环境。通常采用HF切割PAM,MBHA树脂,在切割过程中需要将苯甲醚,对巯基苯酚,对甲苯酚等试剂加入其中。通常采用TFA切割Wang,Rink-Amide,Trt树脂,在切割过程中将三异丙基硅烷,苯酚,乙二硫醇,苯甲硫醚,水等加入。这些添加试剂主要作为碳正离子俘获试剂使用,以对切割反应过程中生成的碳正离子进行俘获为目的,从而使这些碳正离子对部分氨基酸侧链的进攻导致的副反应得以减少。Trp,Tyr为比较容易产生副反应的氨基酸,反应通常,是在室温条件下2h-4h,TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2.5/2.5),HF/p-cresol/p-thiocresol(90/5/5)为常用的切割配比,10-15ml/g树脂为通常的切割试剂用量。


游离氨基检测

在固相多肽合成中,连接效率主要是通过对树脂上游离氨基的检测来进行判断,这种检测方法叫做Kaiser方法。若存在游离氨基,则会有兰色,或红褐色(pro,ser,His)显示,此为该方法的检测结果。2%0。001MKCN的吡啶溶液,80%苯酚的乙醇溶液,6%茚三酮的乙醇溶液均为Kaiser试剂的成分,在配制的过程中,需要先使用茚三酮对吡啶进行处理,重蒸后再使用。在检测的过程中,获取少量树脂,将上述成分各取2-3滴加入,在温度100℃下加热1-2min,若树脂出现兰色,红褐色或者溶液显示兰色,则说有还存在游离氨基,不然表示连接完全。除此以外,溴芬兰法、苦 味 酸法、三硝基苯磺酸法也是对游离氨基检测的方法。


2019-07-30 17:24:04 浏览次数:51次
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