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合成多肽二级结构分析鉴定和纯度分析

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多肽的分析鉴定方法有多肽一级结构,二级结构鉴定,多肽一级结构包括:质谱分析,氨基酸组成分析,氨基酸序列分析。二级结构包括:圆二色谱(CD),NMR,X-衍射等方法。下面就让小编为你介绍一下合成多肽二级结构的分析鉴定和纯度分析。


合成多肽二级结构的分析:

X-衍射

有关化合物晶型的直接信息可以通过X-衍射来获得,并且相对与绝对构型也能够通过其来获得。


核磁共振(NMR)

随着分子生物学、计算机处理技术的发展,二维、三维以及四维NMR的应用,使得NMR逐渐成为大分子结构物质分析的主要方法之一。对于氨基酸序列、分布以及构象的确定可以使用NMR。目前为止,对于分子中含少于30个氨基酸的小肽的分析,NMR的作用非常大,能够就非常准确且快速地获得分析结果。


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圆二色谱(CD)

圆二色谱是一种特殊的吸收谱,它通过对蛋白质等生物大分子的圆二色光谱进行测量,从而使生物大分子的二级结构获得,其快捷,简单,在酶动力学,蛋白质构象研究,蛋白质折叠等领域得到广泛的应用。


圆二色谱紫外区段(190-240nm),肽链为主要生色团,生物大分子主链构象的信息包含于这一波长范围的CD谱中。无规则卷曲构象的CD谱在220nm附近有一小而宽的正峰,在198nm附近有一负峰。β-折叠构象的CD谱在195-198nm处有一强的正峰,在217-218nm处有一负峰。α-螺旋构象的CD谱在190nm附近有一正峰,在222nm、208nm处呈负峰。


纯度分析:

通常均会采用HPLC来进行多肽的纯度分析,选择洗脱梯度,5%B--65%B,时间30min,RP-C18,粒径5μm,孔径300A,4.6×150mm,流动相:A,0.1%TFA/H2O;B,0.1%TFA/ACN。也有些多肽,尤其是短肽,因为具有很强的亲水性,在C18上保留很弱,需要对条件进行改变,主要有以下两种方法:

1.将如七氟丁酸,十八烷基磺酸钠等强离子对试剂加入到流动相中。

2。对分析梯度进行改变,可以将起始梯度改为2%,等度或小梯度洗脱。


2019-07-30 17:44:07 浏览次数:52次
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