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流式细胞仪基本原理

流式细胞仪集电子、计算机、激光、流体理论于一体,其是进行流式细胞分析的仪器。在功能水平上定量分析和分选单细胞或其他生物粒子的一种检测手段,即是流式细胞术。其能够随上万个细胞进行高速分析,并且可以同时从一个细胞中将多个参数测量出来,下面就让小编带你了解一下流式细胞仪的基本原理。


基本原理

染色待测细胞,之后将单细胞悬液制作成功。用一定压力往流动室内压入待测样品,在高压下从鞘液管喷出不含细胞的磷酸缓冲液,待测样品流与鞘液管入口方向成一定角度,如此,鞘液就可以包绕着样品高速流动,使一个圆形的流束组成,在鞘液的包被下待测细胞单行排列,依次从检测区域通过。


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流式细胞仪的发光源一般是激光。在样品流上垂直照射着经过聚焦整形后的光束,在激光束的照射下的被荧光染色的细胞,会有激发荧光和散射光产生。90度方向的光电倍增管和前向光电二极管同时接收这两种信号。在前向小角度进行光散射信号的检测,细胞体积的大小基本上由这种信号来反映。荧光信号的接受方向垂直于激光束,经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离,使多个不同波长的荧光信号形成。所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度由这些荧光信号的强度来代表。通过电倍增管接收后能够转换为电信号,被计算机识别的数字信号能够由连续的电信号通过 A/D转换器转换而成。计算机处理所测量到的各种信号,在计算机屏幕上显示分析结果,也能够打印出来,还能够在硬盘上以数据文件的形式存储,从而为以后的查询或进一步分析做准备。根据不同的测量参数提供了多种检测数据的显示形式。使用直方图的形式来表达单参数数据,其细胞数目为Y轴,测量强度为X轴。通常而言,512或1024通道数为流式细胞仪坐标轴的分辨率,此取决于模数转换器的分辨率。关于双参数或多参数数据,不仅能够对每个参数的直方图单独显示,而且能够对二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图进行选择。


通过对含有单细胞的液滴进行分离来实现细胞的分选。将一个超高频电晶体配备在流动室的喷口上,充电后振动,使喷出的液流断裂为均匀的液滴,在这些液滴之中分散待测定细胞。将正负不同的电荷充入这些液滴中,当液滴从带有几千伏特的偏转板流经时,在高压电场的作用下偏转,往各自的收集容器中落入,往中间的废液容器落入不予充电的液滴,从而使得细胞的分离实现。


2019-10-28 14:34:21 浏览次数:58次
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