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流式细胞染色原则和方法

流式细胞术为一种生物学技术,计数和分选悬浮于流体中的微小颗粒是它的主要用途。这种技术能够用来连续的多参数的分析流过光学或电子检测器的一个个细胞。流式细胞术(Flow CytoMetry,FCM)是通过检测标记的荧光信号使高速、逐一的定量分析和分选悬液中的单细胞或其他生物粒子得以实现的技术。


直接免疫荧光染色法和间接免疫荧光染色法为两种主要的染色方法。

间接标记

间接标记是使用特异的无荧光标记的一抗和被检测的标本反应将没有结合的抗体除去,之后将荧光标记的二抗加入,使得含有荧光的抗原-抗体-抗体混合物生成。如此操作除了步骤复杂,还会将大量的时间耗费掉,因此如今这种方法基本上很少使用了。


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直接标记

直接标记即是在标记的时候将连接着荧光素的特异性抗体加入,相对而言,此种方法比较简单,所以广泛地应用于各个实验室。


按照不同的细胞部位,能够分成细胞表面和细胞内抗。

细胞内染色

对于白血病的免疫分型来说,如TdT,MPO,cCD3,cCD79a的一些胞内抗原的检测就显得尤为重要。使细胞膜通透为胞内染色的要点。往胞内导入抗体或核酸染料,然而不会对细胞骨架的完整性产生影响。并且需要对有关抗原与相应抗体的结合力和核酸与染料的结合不会受到固定和透膜的步骤的影响进行保证。一些对胞内染色适用的试剂可能对表面标记分析不适用。如果不使用EMA的方法,那么通常不能够同时进行细胞活性的检测与胞内染色,对于某些核酸染料(如DAPI、TO、AO等)为活细胞染料,固定或透膜都不需要。


细胞表面染色

细胞表面染色为大多数免疫表型分析所采用的方法。由于在细胞里同时存在着很多抗原,所以,在检测细胞表面抗原时,必须对保持细胞膜的完整十分留意。溶血前标记和溶血后标记均属于表面标记。若标记受到红细胞或者血浆成分的影响,那么溶血后标记应当被采用,然而,需要对溶血剂膜抗原的影响进行留意,因此,固定剂一般不包含在溶血剂内。如阵发性血红蛋白尿的检测和免疫球蛋白轻链检测等。


胞膜和胞内染色

通常,先胞膜染色,固定,膜通透和胞内染色,最后是DNA染色。


2019-10-28 14:51:08 浏览次数:63次

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