DNA合成仪结构、操作规程、特点和发展

北斗棋牌

为您推荐:
中国仪器网 中国仪器网 DNA合成仪

DNA合成仪

产品导购地图

用于和DNA或RNA结构类似的寡核苷酸合成的自动化仪器,即是DNA合成仪。通常用于固相合成法,每次在长的寡核苷酸链上接入一个核苷酸。加入每一个核苷酸均通过相同的化学反应和相应的嘌呤或嘧啶碱基衍生物作用。仪器不同,所用化学反应和操作细节也会随之发生变化。DNA合成的磷酸酰胺法得到了非常广泛的应用。

DNA合成仪
DNA合成仪结构

DNA合成仪结构

用于和DNA或RNA结构类似的寡核苷酸合成的自动化仪器,即是DNA合成仪。通常用于固相合成法,每次在长的寡核苷酸链上接入一个核苷酸。加入每一个核苷酸均通过相同的...[查看全部]

DNA合成仪结构

用于和DNA或RNA结构类似的寡核苷酸合成的自动化仪器,即是DNA合成仪。通常用于固相合成法,每次在长的寡核苷酸链上接入一个核苷酸。加入每一个核苷酸均通过相同的化学反应和相应的嘌呤或嘧啶碱基衍生物作用。仪器不同,所用化学反应和操作细节也会随之发生变化。DNA合成的磷酸酰胺法得到了非常广泛的应用。


结构和性能

1、辅助真空

隔膜形成一个圆顶小空隙为适当运行阀块的关键。每次打开电磁阀时,在隔膜的螺线管一侧形成辅助真空,使一圆顶空隙形成在隔膜。


2、合成柱

起始在一次性的柱子中装有结合在载体(一般为CPG)上的核苷酸,不仅有柱体,而且还有2个固定过滤板和2个接头,由惰性材料制成所有的部件。


1.jpg


3、流路节流阀

小量的试剂长期在流路节流阀中结晶,会阻塞流路。


4、废液和排气

废气提高排气管往适当的排气装置导入,废液瓶能够在在低于仪器的附近工作台上或者合成仪附近的地板上放置。其是一个空立着的10L的聚苯乙烯容器,为大多数化学试剂输送的终点站。


5、电导池

一空隙隔开的两个电极组成了电导流动池,应用一小电压在空隙之间。其设计是为了对每个DNA合成循环内释放的DMT阳离子的总电导进行测定。


6、电池

DNA合成仪通常带有能够使用几年的锂电池。


7、控制器

软件、微处理机、显示屏幕、键板及相关的电子部件为控制器的主要部分,其对合成仪的所有活动进行指导和初始化。


8、试剂驱动系统

DNA 合成仪通常采用一定压力的惰性气体(氩气)或氮气及电磁阀组;来对液体试剂进行驱动,液体试剂也可以使用氦气来进行驱动。如果slider block滑块系统及精密蠕动泵为合成仪所采用,那么驱动系统也可以不采用气体。当采用气体及电磁阀来对液体试剂进行驱动的时候,首先必须将管路系统电磁阀前段,含试剂瓶组中压力加到规定气压,电磁阀手动或利用合成管理软件打开(通常数ms为打开时间数),就能够将液体试剂驱动所需的合成柱中。


9、试剂和碱基瓶组

碱基瓶组及试剂瓶组通

...

与DNA合成仪结构北斗棋牌相关的文章

DNA合成仪操作步骤

用于和DNA或RNA结构类似的寡核苷酸合成的自动化仪器,即是DNA合成仪。通常用于固相合成法,每次在长的寡核苷酸链上接入一个核苷酸。加入每一个核苷酸均通过相同的化学反应和相应的嘌呤或嘧啶碱基衍生物作用。仪器不同,所用化学反应和操作细节也会随之发生变化。DNA合成的磷酸酰胺法得到了非常广泛的应用。


操作步骤

亚磷酰胺DNA合成的试剂:

氨水切除溶液

乙腈清洗溶剂

12氧化混合物

三lv乙酸(TCA)脱保护溶液

N—甲基咪唑封闭试剂

乙酐

四唑偶联催化剂

A、G、C、T亚磷酰胺单体

保护碱基的5/—DM


2.jpg


以以亚磷酰胺寡核苷酸合成为例,操作步骤如下:

1、对合成仪上所有试剂瓶中的试剂量认真检。

2、在合成仪上装上标记好的干净的收集瓶。

3、在合成仪中输入要合成的DNA序列。

4、对选择的合成步骤进行检查。

5、选择结束方法:仪器的原始状态为TritylOffAuto,如果想要通过5,—DMT基团连接纯化寡核苷酸,那么将其转变为TritylOnAuto结束状态。

6、选择结束方法通常是为系统的原始状态。

7、将你所希望的保存名字输入到每个柱监视器的Username下。

8、每一个收集瓶相应的DNA序列标记用代码代替。

9、将每一个柱设置的详细资料打印出来。

10、对打印出来的资料进行检查,判断是否正确。

11、为了确保合成仪上合成柱处于正确的位置,运行StartColumn步骤对每一个柱的位置进行检查。

12、对是否充满连接在合成仪上的溶剂残留(废液瓶)进行检查。

13、保证试管充分清洁干净,保证DMT废液管路通向分部收集器。

14、将循环启动,运行开始程序对试剂管路进行清洗,将原来的试剂除去。


日常维护

1.流路节流阀

应该1个月清洗1次节流阀,以避免阻塞,清洗时,先在水中煮沸15min,然后再在甲醇中超声波清洗。


2.储液瓶

需要保持氩气压力以及管路清洁。瓶子在亚磷酰胺及储液瓶位置上放置。


3.瓶塞“O”形环

zhi少对“O”形环一月检查一次

...

DNA合成仪特点

用于和DNA或RNA结构类似的寡核苷酸合成的自动化仪器,即是DNA合成仪。通常用于固相合成法,每次在长的寡核苷酸链上接入一个核苷酸。加入每一个核苷酸均通过相同的化学反应和相应的嘌呤或嘧啶碱基衍生物作用。仪器不同,所用化学反应和操作细节也会随之发生变化。DNA合成的磷酸酰胺法得到了非常广泛的应用。


特点与性能

根据产物承载容器来分,能够分为两类,分别为无需一次性合成仪两类与一次性合成柱。POLYPLEX, ABI,oligomaker,mermade, ASM等所有品牌合成仪的合成产物的承载容器均使用一次性合成柱(不包括德国polygen系列合成仪)。


根据试剂碱基添加方式分类,电磁阀气动驱动,蠕动泵驱动分别为DNA合成仪的两种类型。

1、采用蠕动泵驱动型

碱基试剂溶液采用精密蠕动泵来进行驱动不同碱基试剂溶液,选择添加通过蠕动泵驱动,相互滑动滑块。德国POLYGEN 系列DNA合成仪为主要的品牌。


3.jpg


2、电磁阀气动驱动型

碱基试剂溶液采用高于大气压的惰性气体(氩气,氮气或氦气)来进行驱动,试剂或碱基溶液的添加通过开合微量电磁阀。mermade系列DNA合成仪、GE系列合成仪、biolytic系列合成仪、oligomaker系列合成仪以及ABI系列合成仪均为DNA合成仪的主要品牌。


根据用途不同,实验室型,工业型和大规模合成为DNA合成仪的三种主要类型。

1、工业型

工业型合成仪主要指单柱合成产物为10-1000nmol且有很大合成通量的DNA合成仪。96柱、192柱为工业型合成仪常见的合成柱数,很少见到384柱或更多合成柱数的合成仪。主要在大型实验室,公用实验平台及商业合成机构适用。金斯特,金维,上海捷瑞,华大基因上海生工,北京赛百盛为国内主要的商业合成机构。

和实验室型品牌相比,有相对比较少的该类型DNA合成仪,在欧洲较常见的工业型合成仪有384柱合成塔和polygen 96柱合成工作站。美国me

...

与DNA合成仪特点北斗棋牌相关的文章

DNA合成仪发展

用于和DNA或RNA结构类似的寡核苷酸合成的自动化仪器,即是DNA合成仪。通常用于固相合成法,每次在长的寡核苷酸链上接入一个核苷酸。加入每一个核苷酸均通过相同的化学反应和相应的嘌呤或嘧啶碱基衍生物作用。仪器不同,所用化学反应和操作细节也会随之发生变化。DNA合成的磷酸酰胺法得到了非常广泛的应用。


发展

高效率、高产率的仪器的开发与研究、应用领域的开拓和机器性能的完善为当前DNA合成仪的主要生产厂商的致力方向。


全世界di一台高密度复制DNA合成仪已经为台湾科学委员会“基因医药卫生科技尖端研究计划”中的基因生物技术组成功研发出来,每天能够对768条DNA进行合成,能够同时对384条不同DNA进行合成。并且能够和聚合酶连锁反应装置相配合,对各种基因大量复制,除了对时间进行节省外,还能够对大量人力进行节省。这部机器能够将防伪基因、动物、人体、植物的基因甚都复制出来。


6.jpg


因为目前DNA合成仪可以合成的最长核酸链的碱基对数量对于人们所需要的大部分核酸的碱基对数量来说还远远不够,所以,还需要对合成工艺不断地进行改善,才能够使较长的核酸分子得到。


不断涌现出按照不同化学方法研制的DNA合成仪,可以将现有核酸合成的碱基对数量限制突破,使大量人力、物力、财力得以节省,以便将来能够对酶的结构进行改变,使其在工业上更有价值。对蛋白质和多肽的结构进行改变,使新药物得以制备,并且对有关人类疾病和遗传调控的新领域进行了开拓。


有效方法

分离和制造目的基因的一些有效方法在基因工程学工作者艰苦细致的探索研究下已经掌握了。通常而言,目前有反向转录法、基因组扩增法、人工合成三种获取目的基因的方法。


1、人工合成

全长引物根据某一蛋白质的基因序列或氨基酸序列,进行设计,模版DNA通过OVERLAP方法来形成,再利用PCR扩增的方法使双链DNA得到,之后在克隆载体或者表达载体中转化克隆PCR产物。目前为止,速度zui快,准确率zui

...

与DNA合成仪发展北斗棋牌相关的文章

人工合成DNA的概念和原理

基因合成是指在体外人工合成双链DNA分子的技术,与寡核苷酸合成有所不同:寡核苷酸是单链的,所能合成的最长片段仅为100nt左右,而基因合成则为双链DNA分子合成,所能合成的长度范围50bp-12 kb。


概念

根据人们的愿望,严格的进行设计,利用体外DNA重组和转基因技术,将新的遗传特性赋予生物,将与人们需要的更符合的新的生物类型和生物产品创造出来,即是基因工程,其又称为NA重组技术,其是在在DNA分子水平前提下设计和施工的。


原理

原理是基因重组,以下为基因重组的基本工具:

1、载体

常用载体

质粒是一种双链环状DNA分子,其具有自我复制能力,于细菌染色体独立存在,裸露,其具有简单的结构,是最为常用的载体。

其它载体

动植物病毒以及噬菌体的衍生物也能够作为载体。

条件

具有供重组DNA的鉴定和选择的基因;具有供外源DNA片段插入的一至多个限制酶切点;可以复制并稳定保存在受体细胞中。


3.jpg


2、限制性核酸内切酶

来源

其主要由原核生物中分离纯化出来。

功能

其可以将双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列识别出来,并且断开每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键,所以专一性为其所具备。

结果

经限制酶切割产生的DNA片段末端一般有黏性末端和平末端两种形式。


3、DNA连接酶

种类

DNA连接酶有两种,分别为T4DNA连接酶和E.coliDNA连接酶。

不同点

T4噬菌体为T4DNA连接酶的来源,大肠杆菌为E。coliDNA连接酶的来源,T4DNA连接酶可以将两种末端均缝合起来,然而连接平末端具有比较低的效率。E。coliDNA连接酶仅仅可以连接双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键。

相同点

均能将磷酸二酯键连接。


...

DNA合成方法

在体外人对双链DNA分子合成的技术,即是基因合成,不同于寡核苷酸合成:寡核苷酸是单链的,大约100nt为其所可以合成的zui长片段。基因合成却是双链DNA分子合成,50bp-12 kb是可以合成的长度范围。


基因合成法合成目的基因的方法分为在体外人为地利用酶学方法或化学方法两类。

1、化学合成法

目的基因的合成方法使用化学法结合酶学法或化学法。1979年以来国外已有包括胰岛素基因,干扰素基因,以及乳糖操纵基因,启动子调节序列等近百种化学合成基因,近百种化学合成基因,先要对所要合成的基因的序列有所了解。能够按照需要来对基因中的一个或几个核苷酸任意增加、减少或变更的随意性是人工合成基因的优越性所在。


2、酶学合成法

将RNA作为模板,通过逆转录合成cDNA。此方法在真核结构基因的获得中zui常用。因为难以对RNA单一组分进行分仪,因此合成的cDNA分子通常不存,分离需要用到基因分子,这种方法获得全长的互补DNA分子不太容易,因此进一步剪切、拼接非常有必要。


7.jpg


合成原理

DNA通过固相亚磷酰胺三酯法合成,仪器自动完成整个合成过程,每个循环分为脱保护、活化、偶合、盖帽(封闭)、氧化五个步骤。


脱保护:

CPG所链核苷上的DMT保护基团用三lv乙酸(TCA)去除,使得5'羟基暴露,为下一步缩合提供便利。


活化:

混合单体与催化剂四唑,往合成柱内放入,3亚磷酸上二异丙胺基的N原子接收四唑转移的一个质子,四唑亲核进攻的离去基团是,质子化的氨,四唑取代二异丙酰胺,使得亚磷酰胺-四唑活性中间体形成。


耦合:

CPG所连接的核苷酸的5′羟基和亚磷酰胺-四唑中间体缩合将四唑缩合脱掉,使得一个碱基的核苷酸链形成并延长。


盖帽:

在后续的循环中,少量未反应(2%)的载体上的核苷酸链的5羟基会参加反应,使得少一个碱基的核苷酸链生成,所以应当在反应后进行封闭。


氧化:

由于耦合形成的三价亚磷酸酯键相当不稳定,因此需要使用氧化剂。按

...

与DNA合成方法北斗棋牌相关的文章

DNA合成常见问题

在体外人对双链DNA分子合成的技术,即是基因合成,不同于寡核苷酸合成:寡核苷酸是单链的,大约100nt为其所可以合成的zui长片段。基因合成却是双链DNA分子合成,50bp-12 kb是可以合成的长度范围。


DNA合成常见问题

怎样按照使用浓度溶解引物?

 记住几个参数:

1OD引物干粉约为33微克;

碱基的平均分子量为324.5;

引物的分子量=碱基数x碱基的平均分子量;

引物的摩尔数=质量数/引物分子量

真空干燥的DNA呈干膜状或粉末状在离心管底部,开启瓶盖时小心不要丢失;请加入足量的水充分振荡溶解。


8.jpg


如何保存引物?

我们提供的干粉DNA从有机溶剂中干燥出来,无菌,无核酸酶。可以室温或-20C密闭长期保存;溶解以后的DNAzui好保存在-200C,溶解引物的水的PH要求大于7,并且无菌。带有荧光标记的引物请注意避光保存。


已经溶解的引物,为什么原先使用正常,而过一段时间再使用就不好了?

如果您溶解引物的水PH过低或污染了菌或核酸酶,会使引物降解。不少实验室用的双蒸水PH<6,使用时没有充分解冻振荡混合,液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。


如何测定引物的OD值?

用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的光密度来定量。请注意紫外分光光度计的使用,测定时溶液的光密度zui好稀释到0.2-0.8之间DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后,取部分溶液稀释到1ml并在1m标准比色杯中测定其光密度,即为所测体积的OD值,进而可以计算出母液的OD值。


如何检测引物的纯度?

实验室方便的作法是用PAGE方法。使用加有7M尿素的16%的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳。取0。2-0。5OD的引物,用尿素饱和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到饱和,上样前加热变性。加入尿素的目的一是变性二是增加样品比重,容易加样。600V电压进行电泳,一定时间后(约2-3小时),剥胶,用荧光TLC板在紫外灯下检测带型,在主带之下没有杂带,说明纯度是好的。(有时由于变性不充分,主带之上可能会有条带,乃是引

...

与DNA合成常见问题北斗棋牌相关的文章